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    ?然而，上调    hlf    抑制    nsclc    的生长，而沉默    hlf    可促进    nsclc    细胞的锚定和悬浮生长能力(图4a和b)，表明沉默    hlf    增强了    nsclc    细胞在悬浮条件下的生存能力，即    anoikis    耐药。这是各种癌症中与远处转移有关的转移性癌细胞的主要特征。

    ?事实上，昼夜节律基因的失调导致了    nsclc    的代谢失调，hlf    广泛参与了多种物质代谢过程，包括脂质和氧化代谢。

    ?在低血清(1%)和低葡萄糖(1g/l)培养液组成的低营养条件下，hlf    过表达抑制了

    nsclc    细胞的增殖，但增加了凋亡潜能，反之亦然（图4c-e）。

    ?    hlf    参与了癌细胞生长培养基的营养代谢，这是    hlf    抑制    nsclc    细胞生长的前提条件。

    ?在低营养条件下观察    nsclc    细胞    hlf    对葡萄糖、脂肪酸和蛋白质的影响。如补充图6a，hlf    表达的改变并不影响总蛋白含量。然而，hlf    的上调降低了葡萄糖、甘油三酯的消耗和乳酸的分泌，但增加了游离脂肪酸的水平(图4f–i)。

    ?矛盾的是，上调    hlf    增加了细胞内    atp    的总产生和    ldh    的活性(补充图6b和c）。这些发现表明，在低营养条件下，过表达    hlf    的癌细胞更容易发生有氧代谢而不是厌氧代谢，这进一步支持了上调    hlf    降低乳酸脱氢酶(ldh)的活性，厌氧糖酵解限速酶，一些厌氧糖酵解和乳酸发酵相关基因，但增强了多个三羧酸循环相关基因(。

    ?相反，沉默    hlf    则表现出相反的代谢特性，促进了    nsclc    细胞的厌氧代谢(图4f-i和补充图6c和d)。上诉结果表明，低表达hlf促进非小细胞肺癌细胞的厌氧代谢。

    ?事实上，即使在氧含量正常的情况下，癌细胞也表现出葡萄糖代谢特征的改变，更倾向于无氧代谢，这一现象被称为“瓦伯格效应”。综上所述，我们的结果表明，低表达    hlf    可促进    nsclc    细胞从三羧酸循环向厌氧代谢的首选代谢途径的转换，从而进一步促进细胞在低营养条件下的生长。

    ?为了进一步确定低营养条件下    hlf    抑制    nsclc    生长和转移的潜在机制，我们将多个信号通路的荧光素酶报告质粒转染到nsclc细胞中。如图5a所示，上调    hlf    显著增强了    nsclc    细胞    ppar    信号活性，抑制了nf-κb信号活性;相反，沉默    hlf    则产生相反的效果(图5a)。

    ?基于    tcga    的    nsclc    数据集中    hlf    的表达进行了基因集富集分析(gsea)，结果显示    hlf的表达水平与    ppar    信号呈正相关，而与    nf-κb    信号呈负相关。根据    gsea    分析，hlf    表达与脂质氧化和糖酵解显著相关(补充图6f)。

    ?重要的是，一些证据表明，hlf    通过增加脂解诱导的游离脂肪酸积累，参与    ppar    的易位和激活，通过破坏    p65    与靶    dna    的结合，nf-κb    信号通路广泛参与了癌症的进展和转移。ppar    信号通路由    pparα、pparβ/δ和    pparγ等几个家族成员组成。因此，确定参与    hlf    抑制    nf-κb    信号通路以及    nsclc    肿瘤发生和转移的特异性    ppar    成员至关重要。

    ?首先，检测10对    nsclc    组织中pparα、pparβ/δ和    pparγ的表达水平。如补充图6g和h，pparα在4/10对组织中表达显著下调，pparγ在8/10对表达，而pparβ/δ在8/10对组织中表达上调。已有广泛报道称    pparα和    pparγ在    nsclc    中起肿瘤抑制信号的作用，而据报道    pparβ/δ对起致癌作用。

    ?    western    blot    分析一致显示，hlf    的上调增加了    pparα和    pparγ的总表达和核易位，增加了iκbα的表达，但降低了磷酸化的    nf-κb    和    p65    的总水平和核水平。相反，沉默    hlf    则发挥了相反的作用。因此，我们的研究结果表明，hlf    在    nsclc    中激活    pparα和    pparγ，抑制    nf-κb/p65    信号通路。

    ?我们使用    pparα激动剂非诺贝特、pparγ激动剂吡格列酮和    nf-κb    信号抑制剂ly2409881，进一步研究了    pparα/pparγ/nf-κb/p65    信号轴在    hlf    在    nsclc    细胞中的功能作用中的意义。

    ?我们的结果显示，在    hlf    沉默的细胞中，非诺贝特和吡格列酮显著上调了    ppar    的活性，而    ly2409881    则没有上。

    ?然而，非诺贝特、吡格列酮和    ly2409881    差异降低了    hlf    沉默细胞中    nf-κb    信号的活性。

    ?重要的是，非诺贝特、吡格列酮和    ly2409881    减弱了    hlf    下调对细胞非锚定生长和抗缺氧能力的刺激作用。相反，非诺贝特、吡格列酮和    ly2409881    逆转了低营养条件下hlf下调对    nsclc    细胞的促增殖（克隆生长）和抗凋亡作用


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